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采血卡完整协议

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采血卡完整协议

发布日期:2018-08-11 作者: 点击:

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  1. 将湿润的12.5毫米圆盘放入旋转柱中。 将12.5 mm收集盘用60μl1X洗脱缓冲液润湿后,使用细尖镊子将圆盘放入旋转柱中,将湿润的圆盘按入旋转柱孔中
      2.Allit全血卡自旋柱含有12.5mm收集盘,用60μl1X洗脱缓冲液润湿,置于含有60μl1X反应缓冲液的1.5ml收集管中。 旋转柱 - 收集管组件应在室温下孵育60分钟,以使全血成分再水合,以进行有效洗脱。
      3.将旋转柱置于含有60μl1X反应缓冲液的1.5ml收集管中。 移取60μl1X反应缓冲液到1.5 ml收集管的底部,将含有12.5 mm收集盘的旋转柱放入1.5 ml收集管中,得到如图4所示的组件。用收集管关闭旋转柱盖上并在室温下孵育组件60分钟,以彻底润湿收集盘上的全血样品。 60分钟的孵育步骤对于从收集盘获得高产量的全血成分是至关重要的。
      4.用蛋白质微阵列反应全血样品60分钟。 将印刷和封闭的蛋白质微阵列基质载玻片(1×25×76mm)置于杂交盒中,并与100μl全血样品在37℃下以500rpm混合反应60分钟。 阵列板杂交站强烈推荐用于蛋白质微阵列反应和染色步骤。 在60分钟反应步骤后,使用PipetteIt TM 8通道高速分配器分配的250μl蛋白质微阵列洗涤缓冲液快速连续洗涤微阵列6次。 在实验台上牢固地倒置并轻敲杂交盒,以去除残留的洗涤缓冲液。
      5.旋转3分钟以收集全血样品并通过涡旋混合。 将旋转柱 - 收集管组件放入高速微量离心机中,以14,000 xg离心3分钟,从收集盘上洗脱全血成分,并进入1.5 ml收集管底部的60μl1X反应缓冲液中。 正确洗脱的全血样品将显示为深红色120μl样品,如图5所示.120μl全血样品应使用中等涡旋混合5秒,以确保洗脱缓冲液,反应缓冲液和全血的正确混合组件。
      6.处理并扫描蛋白质微阵列以获得测试结果。 对于涉及抗体结合的蛋白质微阵列,使用荧光第二试剂以1:5,000稀释度在37℃下以500rpm混合使用阵列板杂交站将蛋白质微阵列染色60分钟。在步骤9中。染色后,使用PipetteIt TM 8通道高速分配器分配的250μl蛋白质微阵列洗涤缓冲液快速连续洗涤微阵列6次。 从杂交盒中取出微阵列载玻片,在蒸馏水中浸泡3秒,在微阵列高速离心机中离心干燥5秒,并使用ArrayitInnoScan?扫描花青5通道中的荧光发射。微阵列扫描仪。 使用Mapix?软件量化扫描图像以获得测试结果。

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