采血卡厂家诠释从头发样本中提取DNA

发布日期：2019-10-27 作者：点击：

采血卡厂家诠释从头发样本中提取DNA

采血卡厂家诠释从头发样本中提取DNA是，使用微观玻璃研磨和有机溶剂提取方案的改进版本从毛干中分离DNA。由于这些方案使标本暴露于污染风险增加，本研究使用二硫苏糖醇（DTT）（Hi-media）以光滑的化学消化方法取代了繁琐的物理消化方法，因为它是一种相对较强的还原剂。高盐含量和阴离子洗涤剂。将消化缓冲液（500μl; 10mM Tris-HCl，10mM EDTA，50mM NaCl，20％SDS，pH7.5）与40μl1MDTT一起加入1.5ml微量离心管中（至终浓度）~80mM，240mM乙酸钠，pH5.2）和15μl10mg/ ml蛋白酶K（至终浓度~0.3mg / ml; Himedia）。在涡旋之前将头发样品加入到该溶液中并在56℃下孵育2小时。孵育2小时后，再次涡旋样品管，再加入40μl1MDTT和15μl10mg/ ml蛋白酶K，然后温和混合并在60℃下再孵育2小时或直到头发完全溶解。

然后用等体积的苯酚：氯仿：异戊醇溶液（25：24：1）从每个样品中提取DNA，并通过将管倒置几分钟轻轻混合。将样品以10,000g （4℃）离心（Eppendorf 5415R）10分钟，然后将上层水层转移到新鲜的灭菌微量离心管中。加入RNaseA（10μl，10mg / ml; Fermentas，Thermo Scientific）并保持在37℃温育30分钟。加入等体积的氯仿：异戊醇，再次在10,000g （4℃）下离心（Eppendorf 5415R）10分钟。将上层水层转移到新鲜的灭菌微量离心管中，然后加入两倍体积的冷冻异丙醇和十分之一体积的3M乙酸钠。将样品在-20℃下冷却1小时以进行DNA沉淀。将样品在10,000g（4℃）下离心（Eppendorf 5415R）10分钟。弃去上清液，加入250μl70％乙醇，轻轻敲打沉淀，然后以10,000rpm进一步离心（Eppendorf 5415R）10分钟。弃去上清液，将沉淀物在层流气流中风干，重悬于50μl无核酸酶水或1×TE缓冲液中，并在-20℃或-80℃冷冻保存。