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采血卡厂家诠释从血液样本中提取DNA

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采血卡厂家诠释从血液样本中提取DNA

发布日期:2019-10-08 作者: 点击:

采血卡厂家诠释从血液样本中提取DNA

关于DNA如何从血液中提取,下面由采血卡厂家为大家诠释如何从血液样本中提取DNA。首先通过使用低渗缓冲液(碳酸氢铵和氯化铵; Himedia)裂解红细胞(RBC)来分离来自全血的淋巴细胞,对淋巴细胞具有最小的裂解作用。将三体积的RBC裂解缓冲液加入血液样品中并通过涡旋混合并彻底倒置5分钟并以20,00g离心(Eppendorf 5415R10分钟。大部分上清液丢弃,留下约1ml以防止细胞损失。向沉淀中加入3体积RBC裂解缓冲液,并将涡旋,翻转和离心步骤重复2-3次,直至获得澄清的上清液和干净的白色沉淀。 最后一次洗涤后,将上清液完全弃去,将沉淀重悬于500μlPBS中,然后加入400μl细胞裂解缓冲液(10mM Tris-HCl10mM EDTA50mM NaCl10SDSpH 7.5)和10μl蛋白酶K10mg / ml原液; Himedia)。将样品涡旋以完全溶解沉淀,并在56℃下在水浴(CW-30G; Jeio Tech)中孵育2小时以进行裂解。随后将等体积的苯酚(用Tris平衡,pH8)加入管中并通过倒置1分钟充分混合。将管在10,000g 4℃)下离心10分钟,将含水上层转移到含有等体积(11)苯酚和氯仿:异戊醇(241)的新管中。通过倒置将管混合1分钟并以10,000g (在4℃下)离心10分钟。 然后将上清液转移到新管中,加入10μl10mg/ ml RNase AFermentasThermo Scientific)

将样品在37℃下孵育30分钟,然后加入等体积的氯仿:异戊醇(241)并通过将管倒置1分钟并在10,000g 4℃)下离心10分钟进行混合。将上清液转移到新管中,加入两倍体积的无水乙醇(Merck)并轻轻倒转几次并在-20℃下冷却,然后在10,000g 4℃)下离心20分钟。弃去上清液,加入250μl70%乙醇,轻轻敲打沉淀,然后以10,000rpm离心10分钟并轻轻倒出上液。颗粒在层流气流中风干,将干燥的沉淀重悬于50μl无核酸酶的水或1×TE缓冲液中,并在-20℃-80℃冷冻储存。

采血卡厂家

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